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circRNA的miRNA分子海绵功能

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circRNA的miRNA分子海绵功能

1、研究背景

miRNA具有通过直接的碱基互补配结合靶向mRNA的非编码区,进而影响其翻译的功能。最近,内源性竞争性miRNA海绵在人和植物中均有发现。大量的研究也发现在人和小鼠的脑组织中存在着大量的环状RNA,在这个研究中,作者发现有一个环状RNA具有特异性结合miR-7的功能,作者将这个环状RNA命名为ciRS-7(circularRNAspongeformiR-7),这个环状miRNA上有超过70个miR-7的结合位点。进一步的功能研究发现ciRS-7能够强烈的抑制miR-7的活性,进而激活miR-7的下游基因。在小鼠脑组织中,也通过实验证明ciRS7与miR-7具有重叠共表达性,此外作者还发现环状RNASRY-9可以作为miR-138的分子海绵。这反应出环状RNA作为miRNA的分子海绵可能是一个普遍的现象。

2、研究路线

circRNA的miRNA分子海绵功能 第2张

3、材料选择

工具细胞,小鼠脑组织

4、研究技术

qPCR,Northernblot,荧光素酶报告体系

5、研究内容

ciRS-7的发现

首先作者给出了ciRS-7的基因组中的定位,并给出了miR-7的可能的结合位点。然后作者构建了ciRS-7的表达体系,通过体外实验证明ciRS-7可以结合miR-7。

circRNA的miRNA分子海绵功能 第3张

图-7的基因组定位以及miR-7的结合位点;

-7的表达载体示意图;

-7的表达检测

hernbolt检测ciRS-7对miR-7家族的表达影响,miR-15b为阴性对照

证实ciRS-7可以与miR-7相互作用

作者通过共沉淀发现ciRS-7可以与miR-7相互结合,这种结合在细胞中和脑组织中存在。

circRNA的miRNA分子海绵功能 第4张

图2.a、b.共沉淀检测ciRS-7对的吸附作用;

c、d.细胞中证实ciRS-7与miR-7具有表达位置上的重叠性,提示二者相互作用,miR-7下游基因的表达有影响,证实可以改变miR-7的活性;

e.脑组织中表达同样有时空一致性

靶向实验证实ciRS-7可以靶向结合miR-7并调控其下游基因

通过荧光素酶报告体系,作者证明ciRS-7直接靶向结合miR-7,通过检测下游基因的表达,证实ciRS-7靶向结合miR-7后影响了后者的生物学活性。

circRNA的miRNA分子海绵功能 第5张

图3.a,b.荧光素酶报告体系的构建示意图;

e-h.相关基因的表达水平

环状RNASRY-9也具有miR-138海绵的作用

作者从生物信息和表达验证的角度证实环状RNASRY-9也具有miR-138海绵的作用。

circRNA的miRNA分子海绵功能 第6张

图4.a,miR-138结合位点示意图;

b,荧光素酶体系检测;

c,d,共沉淀检测二者相互结合

6、结论

环状RNAciRS-7具有miR-7的分子海绵的功能,通过竞争性结合miR-7,从而具有抑制miR-7的功能,从而活化miR-7的下游基因。这种作用在环状RNASRY-9中也同样存在,其可以作为miR-138的分子海绵。由此可见,环状RNA这类分子具有miRNA分子海绵的作用。

7、参考文章

HansenTB,JensenTI,ClausenBH,re,2013,495(7441):384-388.

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